5.Beclin1、ATG5、LC3蛋白表达水平的检测 采用蛋白免疫印迹法检测。先用PIRA裂解液和蛋白酶抑制剂提取肺组织中的总蛋白，用BCA法测相应的蛋白浓度，95℃加热10min使蛋白变性。利用12%分离胶进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺(SDS-PAGE)电泳，然后恒定110V转至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上，5%的脱脂奶粉室温下封闭1.5h后，分别敷上一抗Beclinl、ATG5、LC3、GAPDH(抗體稀释比例均为1：1000)，4℃过夜。将条带用TBST缓冲液洗4次，每次7min，室温下孵育相应的二抗(1：5000)持续1h、继续用TBST缓冲液洗脱4次，每次7min、用高灵敏度化学发光检测试剂盒进行化学发光反应，显影、定影，用Image J行灰度值分析、Prism 6.0行图像分析。

    三、统计学处理

    采用SPSS 22.0进行数据分析。符合正态分布的计量资料以x±s表示，多组比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

    结果

    一、成功构建由OVA诱导的小鼠哮喘模型

    相对于空白对照组和致敏组而言 ......