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编号:13552290
CCR5第一、二胞外环特异性结合短肽对大鼠损伤性结肠上皮细胞的重建作用与机制(2)
http://www.100md.com 2019年5月1日 《新医学》 20195
     取第2代细胞,以1×104/ml密度种于85孔板,每孔100μl,共5组(含无细胞空白对照组)。24h贴壁后加入TNF-α使其终浓度为0、50、100、150ng/ml、培养1~8d(每48h换液),加入CCK8,孵育1h。酶标仪测定450nn波长下各孔吸光度(ODQ450)。以时间为横轴,以OD值为纵轴绘制各组细胞生长曲线。

    5.透射电镜观察正常和损伤性上皮细胞

    取第2代细胞种于培养皿,设正常对照组和损伤模型组,正常对照组不处理,损伤模型组TNF-α以150ng/ml刺激细胞,48h后电镜固定液4'C固定3h,回收细胞并经包裹、再固定、漂洗、脱水和包埋后,制成厚度约50~80nn的切片,醋酸双氧铀、枸橼酸铅双染后透射电镜观察。

    6.应用拮抗短肽干预损伤性上皮细胞

    取第2代细胞种于96孔板,设5组细胞孔和1组空白孔,对照组为不加短肽的损伤模型组。24h细胞贴壁后,TNF-α以150ng/ml浓度作用于各组细胞 ......
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