3. 引物设计及合成

    针对pUC57-hTBC1D10C质粒设计基因引物：pUC57-hTBC1D10C-EcoRⅠ-F：5’-CCGGAATT-CGCCACCATGGCCCAGGCCCTGGGGGAG-3’;pUC57-hTBC1D10C-BamHⅠ-R：5’-CGCGGATCC-TCAGAAGCGGGTGTCCAGGAAGGAGGTG-3’(加粗标记位点为酶切位点)。引物的设计和合成由美国Invitrogen公司完成。

    二、方 法

    1. pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro载体的构建

    PCR扩增在引物中引入了EcoRⅠ和BamH Ⅰ酶切位点的hTBC1D10C，琼脂糖凝胶回收目的条带，提取目的基因NDA。对载体质粒pLVX-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro和回收的目的hTBC1D10C基因行EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切，酶切片段在T4 DNA Ligase的作用下连接 ......